人CYP3A5基因中一种新型地塞米松反应增强子的鉴定及其在人和大鼠肝细胞中的激活。
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Schuetz JD, Schuetz EG, Thottassery JV, Guzelian PS, Strom S, Sun D
人CYP3A5基因中一种新型地塞米松反应增强子的鉴定及其在人和大鼠肝细胞中的激活。
Mol Pharmacol 1996 Jan;49(1):63-72。
- PubMed ID
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8569713 (PubMed视图］
- 摘要
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人肝细胞色素P450 3A (CYP3As)，与大鼠糖皮质激素诱导形式同源，由至少4个差异表达成员组成。为了开始研究CYP3A5糖皮质激素调控中的分子事件，我们将CYP3A5的5'序列与含有单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子的氯霉素乙酰转移酶基因融合在一起。在HepG2细胞中，最大的5' CYP3A5基因片段(1.4 kb)抑制了TK启动子。然而，加入10微米地塞米松可克服抑制作用。一系列单向缺失显示了一个独特的219 bp片段(转录起始位点上游-891至-1109 bp)，该片段使TK启动子具有地塞米松响应性，与启动子的距离或方向无关，因此似乎是一种增强子。该CYP3A5增强子的核苷酸序列分析显示没有一致的15 bp糖皮质激素反应元件(GRE) (GGTACANNNTGTTCT);然而，发现两个GRE“半位点”(TGTTCT)相隔160 bp。尽管地塞米松在HepG2细胞中仅刺激了3-4倍的CYP3A5增强子，但在永生原代人肝细胞和原代大鼠肝细胞培养中，CYP3A5增强子分别被刺激了7-和12倍。糖皮质激素受体(GCR)似乎是这一过程中不可或缺的，因为1)地塞米松诱导可以被抗糖皮质激素RU-486阻断，2)HepG2细胞中CYP3A5增强子的地塞米松依赖性转录激活需要共转染包含完整GCR的表达载体，然而3)在地塞米松存在的情况下，与含有GCR配体结合域突变的质粒共转染不会激活CYP3A5增强子。 To further localize the dexamethasone responsive region of the 219-bp CYP3A5 enhancer, it was subdivided and fused to the TKCAT expression vector. Transfection analysis in HepG2 cells demonstrated that neither GRE half-site can independently confer dexamethasone responsiveness on the TK promoter. Block mutations of either of the two GRE half-sites or point mutations at specific GCR binding sites eliminates dexamethasone inducibility, demonstrating the half-sites need to interact. Electromobility shift assays indicate that the CYP3A5 5'-GRE half-site 1) specifically binds purified GCR, 2) can displace binding of the GCR to a consensus GRE, and 3) shifts a protein in HepG2 nuclear extracts that is supershifted by GCR antibody, demonstrating that this enhancer is an authentic GRE. This is the first study to demonstrate that a member of the human CYP3A gene family contains an enhancer that binds the GCR and that this binding is critical to transcriptional activation by dexamethasone.