质膜Ca2+泵异构体4a与异构体4b在钙调蛋白结合和激活动力学的机制上不同:对Ca2+信号传导的影响。
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Caride AJ, Filoteo AG, Penniston JT, Strehler EE
质膜Ca2+泵异构体4a与异构体4b在钙调蛋白结合和激活动力学的机制上不同:对Ca2+信号传导的影响。
中国生物化学杂志。2007年8月31日;282(35):25640-8。Epub 2007 6月26日。
- PubMed ID
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17595168 (PubMed视图］
- 摘要
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质膜钙泵(PMCA)异构体在调控域的抑制作用和与钙调素(CaM)的相互作用方面存在差异。为了探究这些差异，研究了CaM对PMCA4a的影响动力学，并与PMCA4b进行了比较。CaM激活PMCA4a的最大表观速率常数几乎是PMCA4b的两倍，而这两种亚型的激活速率对Ca2+的依赖性相似。CaM去除PMCA4a的失活速度也快于PMCA4b, Ca2+的影响要小得多(2倍与30倍的修饰)。决定总体速率的各个步骤的速率常数是从停止流动实验中获得的，其中TA-CaM的结合是通过其荧光的变化来观察的。TA-CaM与PMCA4a的两种构象结合，一种具有高活性的“开放”构象，一种具有低活性的“封闭”构象。与PMCA4b相比(Penheiter, a . R.， Bajzer, Z.， Filoteo, a . G.， Thorogate, R.， Torok, K.和Caride, a . J.(2003)生物化学41,12115 -12124)，PMCA4a的模型预测封闭形式的抑制更少，开放和封闭形式之间的平衡更快。基于现有的动力学参数，我们确定了在pmca4b过表达的中国仓鼠卵巢细胞中Ca2+信号的形状常数。使用PMCA4a的常数，并允许其他系统的参数发生微小变化，从而导致Ca2+信号，然后我们模拟了PMCA4a对中国仓鼠卵巢细胞中Ca2+信号形状的影响。结果再现了已发表的数据(Brini, M.， Coletto, L.， Pierobon, N.， Kraev, N.， Guerini, D.， and Carafoli, E. (2003) J. Biol。 Chem. 278, 24500-24508), and thereby demonstrate the importance of altered regulatory kinetics for the different functional properties of PMCA isoforms.