净化和生化特性的一些重组体人犬尿氨酸酶的性质。
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沃尔什哈,堵塞NP
净化和生化特性的一些重组体人犬尿氨酸酶的性质。
4月。2002欧元;269 (8):2069 - 74。
- PubMed ID
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11985583 (在PubMed]
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重组体人犬尿氨酸酶(EC 3.7.1.3 L-kynurenine水解酶)纯化同质性(产出)Spodoptera frugiperda (Sf9)包含犬尿氨酸酶基因的杆状病毒感染细胞。净化协议由硫酸铵沉淀和几个色谱步骤,包括DEAE-Sepharose CL-6B,羟磷灰石,强劲的阴离子和阳离子的分离。酶的纯度由SDS /页面,和分子质量验证了MALDI-TOF女士52.4 kDa的单体的分子质量> 99.99%的预测分子质量决定的。全酶导致的紫外吸收光谱峰值在432海里。最佳pH值为8.25和酶表现出很强的依赖缓冲区的离子强度的最佳活动。这个克隆酶是高度特定3-hydroxykynurenine(公里= 3.0 microm + / - 0.10),抑制L-kynurenine (Ki = 20 microm), d-kynurenine (Ki = 12 microm)和合成底物类似物D, l - 3, 7-dihydroxydesaminokynurenine (Ki = 100海里)。犬尿氨酸酶的活动/浓度剖面从这个来源是s形的所有实例。似乎有部分抑制衬底,多余的5 '磷酸吡哆醛被发现被抑制。