多个活动网站构象揭示了遥远的网站鸟氨酸脱羧酶的突变。
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杰克逊路,鲍德温J, Akella R,戈德史密斯EJ,菲利普斯马
多个活动网站构象揭示了遥远的网站鸟氨酸脱羧酶的突变。
生物化学。2004年10月19日,43 (41):12990 - 9。
- PubMed ID
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15476392 (在PubMed]
- 文摘
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鸟氨酸脱羧酶(ODC)是一个专为吡哆醛催化的5 ' -phosphate-dependent脱l-ornithine腐胺,聚胺生物合成的一个至关重要的一步。以前诱变ODC二聚体界面的分析确定一些残留物,是远离的活性部位对催化活性的影响大于对二聚体的稳定性(迈尔斯,d . P。40,et al。(2001)生物化学,13230 - 13236]。为了更好地理解这一现象的基础,结构的锥虫属brucei ODC突变K294A决心2.15决议与衬底模拟d-ornithine复杂。这个残留是遥远的从活性中心(> 10从革新劳工党席夫碱),及其突变催化效率减少了3千卡每摩尔。x射线结构表明,残留的突变增加了障碍低浓缩铀ala - 172 - 166(赖氨酸- 169循环),通常与赖氨酸- 294在二聚体形式交互界面。反过来,赖氨酸- 169循环形式与活性位点的相互作用,表明降低了催化效率是由这个循环的稳定性下降。障碍的程度不同的四个赖氨酸- 169循环的不对称单位,这表明突变导致活性构象的人口的增加。结构也显示,突变影响了配体的性质的物种。每个四个活跃的网站包含不同寻常的配体。电子密度显示一个活跃的站点包含与d-ornithine gem-diamine中间; the second has density consistent with a tetrahedral adduct with glycine, and the remaining two contain tetrahedral adducts of PLP, Lys-69, and water (or hydroxide). These data also suggest that the structure is less constrained in the mutant enzyme. The observation of a gem-diamine intermediate provides insight into the conformational changes that occur during the ODC catalytic cycle.