的大规模筛选试验carboxyltransferase乙酰辅酶A羧化酶的亚基。
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澳网N, Brtva T, ro SV, Siegel K,沃尔德罗普GL
的大规模筛选试验carboxyltransferase乙酰辅酶A羧化酶的亚基。
学生物化学肛门。2006年7月1日,354 (1):70 - 7。2006年5月3日Epub。
- PubMed ID
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16707089 (在PubMed]
- 文摘
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耐药病原菌的大幅增长的一个结果是需要新的抗生素的目标。由于细菌生长膜脂质生物起源是至关重要的,酶的脂肪酸生物合成途径提供有吸引力的新抗生素的发展可能性。Acetyl-coenzyme羧化酶(ACC)催化承诺和监管的第一步在细菌脂肪酸生物合成,从而是抗生素的主要目标发展。ACC多功能酶由三个独立的蛋白质。生物素羧化酶组件催化ATP-dependent生物素羧化作用。生物素羧基载体蛋白功能生物素分子共价结合的Lys122大肠杆菌酶。carboxyltransferase亚基催化转移生物素的羧基acetyl-coenzyme malonyl-CoA(乙酰辅酶a)形式。本研究的目的是开发一个化验为抑制剂的高通量筛选carboxyltransferase亚基。carboxyltransferase反应化验在相反的方向malonyl-CoA反应与生物胞素(一种模拟生物素的羧基载体蛋白)形成乙酰辅酶a和carboxybiotin。乙酰辅酶A的生产以及柠檬酸合成酶,柠檬酸生产和辅酶A的辅酶A形成检测使用5、5 ' -dithiobis (2-nitrobenzoic酸)(Ellman试剂)。 The assay has been developed for use in both 96- and 384-well microplate formats and was validated using a known bisubstrate analog inhibitor of carboxyltransferase. The spectrophotometric readout in the visible absorbance range used in this assay does not generate the number of false negatives associated with frequently used NAD/NADH assay systems that rely on detection of NADH using UV absorbance.